主人公の名前は「穂積陽菜（ほづみひな）」。彼女は平凡なOL生活をおくっていたが、ある日突然、遠くに住む伯父から不動産を相続することになった。相続した物件はなんと、「百鬼夜行（ひゃっきやこう）旅館」という、全国的に有名な幽霊屋敷だった。陽菜は迷いながらも、子供の頃から心惹かれていたそれに入ることを決め、秘書を雇ってかかりきりで経営することに。
しばらくして、陽菜は幽霊屋敷に住み着いた固有の幽霊「一ノ鯉（いちのこい）さん」と出会う。初めは怖がっていた陽菜だが、少しずつ彼女と仲良くなり、一ノ鯉さんと共に自然と幽霊たちの話も聞くようになっていた。
しかし、ある日、幽霊たちから「百鬼夜行旅館を守るためには、必ず誰かが犠牲にならなければならない」と告げられる。深刻な状況に陥った陽菜は、一ノ鯉さんとともに人間社会を探し、旅館を救うための解決策を探ることに。
そして、陽菜はふとしたことから偶然出会った、旅館の守り神の正体をつきとめた。そして、その守り神に懇願し、旅館を守るために犠牲を出すことなく幽霊たちと和解させることに成功した。
穂積陽菜が百鬼夜行旅館を守るために、幽霊たちと協力して人間も魂も大切にする「新しい旅館の方針」を打ち出し、再び旅館は繁盛することになったのであった。
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